loadingbuffer 也就是蛋白电泳上样缓冲液，常规储存一般是浓缩版本，最常见是 5 倍或者 6 倍浓缩液，稀释的时候优先使用无酶纯水或者去离子水，这是绝大多数实验室标准做法，部分特殊实验方案也会使用样品缓冲液原液对应的稀释体系，不能随便用 PBS 或者生理盐水直接稀释，这点很多新手容易出错。loadingbuffer 里面包含溴酚蓝染料 甘油 还原剂比如 DTT 或者 β 巯基乙醇 缓冲盐成分，稀释的核心目的就是把高倍浓缩液调到工作浓度，也就是 1 倍工作液，稀释过程只是降低各组分浓度，不能引入额外盐离子破坏电泳体系，如果用高盐溶液稀释，上样之后会造成条带歪 拖尾 泳道变形，影响 SDS PAGE 电泳结果。还要特别注意，如果 loadingbuffer 里面已经预先加好还原剂，稀释之后尽量尽快使用，不要长时间存放，还原剂容易氧化失效，这个是做蛋白电泳经常踩坑的细节。

核心原理

浓缩 loadingbuffer 的配方是按照高浓度配比设计，里面甘油负责增加样品密度，让样品沉到加样孔底部，溴酚蓝用来指示电泳前沿，缓冲盐维持 pH 稳定，SDS 结合蛋白让蛋白带上负电。稀释溶剂只需要是低离子强度的纯水，不会改变原有组分比例，只等比例降低浓度，这样稀释完成之后依然可以保持 1 倍工作液的电泳性能。如果选择其他高盐溶剂，额外增加离子强度，会改变凝胶内部电场分布，电泳的时候样品迁移速度异常，条带质量变差。

稀释操作步骤

第一步 确认手头 loadingbuffer 的浓缩倍数，常见是 5 倍 6 倍 10 倍

第二步 计算配比，比如 5 倍 loadingbuffer，就是 1 份浓缩 loadingbuffer 加上 4 份纯水，最终得到 1 倍工作液

第三步 取对应体积无酶去离子水，缓慢加入浓缩 loadingbuffer 里面，轻轻吹打混匀，不要剧烈震荡产生大量气泡

第四步 稀释完成之后，可以直接和蛋白样品混合上样，也可以现配现用

第五步 若实验方案有特殊要求，严格按照实验 SOP 指定溶剂，不要自行更换稀释溶剂

不同稀释溶剂对比表格

补充重要细节

很多人混淆两种场景，第一种是稀释浓缩 loadingbuffer 原液本身，第二种是 loadingbuffer 和蛋白样品混合，后者是样品和 loadingbuffer 按比例混合，不是稀释 loadingbuffer 原液，两个场景不要搞混。另外部分商业化成品 loadingbuffer 是已经调好的 1 倍工作液，这种不需要再稀释，直接使用。如果是还原型 loadingbuffer，DTT 需要临用前添加，稀释之后不建议长期保存，分装冻存更好。

【常见问题】

问题 1 loadingbuffer 稀释可以用 PBS 吗

回答 1 loadingbuffer 稀释常规不推荐 PBS，loadingbuffer 稀释首选去离子纯水，PBS 含盐，loadingbuffer 稀释之后上样容易出现条带拖尾变形，只有实验 SOP 明确要求才可以使用 PBS 做 loadingbuffer 稀释。

问题 2 5 倍 loadingbuffer 稀释配比是多少

回答 1 5 倍 loadingbuffer 稀释，按照 1 份浓缩 loadingbuffer 加 4 份去离子水完成 loadingbuffer 稀释，稀释之后得到 1 倍工作浓度，loadingbuffer 稀释全程保持轻柔混匀。

问题 3 loadingbuffer 稀释之后能长期保存吗

回答 1 普通 loadingbuffer 稀释之后不建议长期存放，尤其是添加还原剂的 loadingbuffer 稀释液，还原剂容易氧化失效，loadingbuffer 稀释最好现配现用，需要保存建议分装低温冻存。

问题 4 能不能用 TE 溶液做 loadingbuffer 稀释

回答 1 普通 SDS PAGE 实验不推荐 TE 做 loadingbuffer 稀释，loadingbuffer 稀释首选去离子水，TE 含有缓冲盐成分，loadingbuffer 稀释之后有可能影响电泳迁移，只有特殊实验方案指定才使用 TE 进行 loadingbuffer 稀释。

【免责申明】

本文为蛋白电泳实验基础知识科普，具体稀释方式请以试剂盒说明书以及本实验室 SOP 为准，实验结果受样品 凝胶 电泳条件多重因素影响，内容仅作学习参考，不替代正式实验方案。